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更新時間：2020-02-13
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分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
核酸的定量
核酸的定量是分光光度計使用頻率zui高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的zui高吸收峰的吸收波長260nm。每種核酸的分子構成不一，因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對應的系數。如：1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經過上述系數的換算，從而得出相應的樣品濃度。測試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾后測試空白液和樣品液。然而，實驗并非一帆風順。讀數不穩(wěn)定可能是實驗者zui頭痛的問題。靈敏度越高的儀器，表現出的吸光值漂移越大。
分光光度計使用事項說明：
1．分光光度計應放在干燥的房間內，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向分光光度計吹風，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
2．使用分光光度計前，使用者應該首先了解分光光度計的結構和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應該對分光光度計的安全性能進行檢查，電源接線應牢固，通電也要良好，各個調節(jié)旋鈕的起始位置應該正確，然后再按通電源開關。
3．在分光光度計尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進行調節(jié)。
分光光度計的重要配件—— 比色杯
比色杯按照材質大致分為石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根據不同的測量體積，有比色杯和毛細比色杯等。一般測試核酸和紫外定量蛋白，均采用石英杯或者玻璃杯，但是不適合比色法測定。因為反應中的染料（如考馬斯亮蘭）能讓石英和玻璃著色，所以必須采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不適合用于在紫外范圍內測試樣品。
由于另外測試的樣品量不同，所以一般分光光度計廠家提供不同容積的比色杯以滿足用戶不同的需求。目前市場已經存在一種既可用于核酸、紫外蛋白質定量，亦可用于蛋白比色法測定的塑料杯，樣品用量僅需50μl，比色杯單個無菌包裝，可以回收樣品。如EppendorfUVette®塑料比色杯，是目前比色杯市場上一個革新。隨著生命科學以及相關學科發(fā)展，對此類科學的實驗研究提出更高的要求，分光光度計將是分子生物學實驗室*的儀器，也成為微生物、食品、制藥等相關實驗室的*設備之一。
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